Séquençage de l'ADN : méthode de Sanger

salut les 2

Salut !

Initialement, on part plusieurs fragments d'une molécule d'ADN simple brin que l'on place dans un milieu réactionnel contenant des désoxyribonucléotides (dNTP) et une ADN-polymérase.
Si l'on laisses les choses en l'état, les la polymérase va faire son travail et apparier les dNTP par complémentarité avec le simple brin, ce qui va permettre d'obtenir une molécule d'ADN double brin.

Le séquençage de Sanger est une méthode qui vise à obtenir des informations sur une séquence d'ADN inconnue. On part donc toujours des fragments d'une molécule simple brin, et en plus des dNTP et de l'ADN-polymérase, on ajoute 1% de di-désoxyribonucléotides (ddNTP) dans le milieu.
La polymérase va continuer de faire son travail, mais parfois elle va rencontrer des ddNTP : dans ce cas l'élongation s'arrête (car pas de condensation possible).

Ainsi, l'incorporation des ddNTP est rare et aléatoire par rapport à celle des dNTP, ce qui va faire que statistiquement, on aura autant de fragments se terminant par un ddNTP que de bases correspondant à la séquence, c'est-à-dire qu'on obtiendra des fragments qui font tous la même taille, à une base près (donc un fragment de 1 base, un de 2 bases, un de 3 bases, etc), ce qui permettra de déterminer la séquence de la molécule d'ADN initial.


Voilà, j'espère que c'est plus clair !
Bon courage