experience immunofluorescence indirect avec des heterocaryons et AC secondaire

bonjour ! 

dans le chapitre sur le plasmalemme 

pour prouver le déplacement des protéines on fait une première expérience qui est l'immunofluorescence indirect avec des heterocaryons.

On a des cellules humaines et des cellules de souris 
et dans mon cours j'ai marqué on a deux types d'AC, les AC anti protéine humaine et les AC anti protéine de souris 

mais donc c'est indirect car ces AC sont des AC de souris anti protéine humaine et des AC humain anti protéine de souris c'est bien ça ??

je ne comprend pas pq les AC anti protéine humaines et AC anti protéine de souris sont des AC secondaire ( ça doit être des AC secondaire vu que c'est de l'immunofluo indirect ) ?

et est ce que dans la deuxième expérience du phénomène de capping, les AC protéines membranaire sont des AC primaire ou secondaire ? 

merci

salut,

dans ta 1er expérience, pour l immunofluorescence indirect, les Ac sont dits secondaires car on en utilise 2 (Ac anti protéine humaine et anti protéine de souris) pour parvenir à réaliser notre expérience.
Tu verras mieux le principe en ED mais disons que tu as un Ac anti protéine humaine et un Ac anti protéine de souris sur lesquels on a fixé des fluorochromes pour mieux les visualiser.
leur fusion va être favorisée pour former un hétérocaryon.
Ensuite, on ajoute à nouveau des Ac qui vont se fixer à nos 1er Ac. on les observe alors en microscopie de fluorescence.
on obtient un mélange des fluorescence car les protéines se déplacent.

Pour prouver ce phénomène on a du utilisé des Ac humain et des Ac souris pour visualiser les hétérocaryons, puis des Ac anti protéine souris et humain pour visualiser le mouvement, soit 2 types d Ac d où une qualification de "indirect", donc tu avais raison.
(il existe donc des Ac et des Ac anti qq)

Pour moi, le Capping est plutôt "direct" même si je ne l ai jamais vu précisé en cours car la fluorescence est fixée dès le départ à un seul type d Ac. c est ton fluorescence qui se modifie au fil du temps car la on cherche à observer le mouvement des protéines en général (effets cis et trans) donc on peut le faire de facon directe.

en espérant t avoir éclairé

bon courage

oui merci beaucoup

Hello!!

Je ne comprends pas très bien quels sont les anticorps primaires et les anticorps secondaires utilisés dans cette expérience, dans le post il y a marqué que les AC anti-récepteurs (de souris/humains) sont marqués par les fluorochromes. Mais ces anticorps sont-ils les primaires ou les secondaires? Parce que pour moi, les anticorps secondaires se fixent sur des anticorps primaires et non sur des récepteurs.
Merci bcp pour votre aide!!